[发明专利]特异结合分析方法及用于其的特异结合分析装置

说明书

技术领域

本发明涉及实施对试料中的分析对象物的定量或定性的特异结合分析方法及用于其的特异结合分析装置。

背景技术

近年来，随着家庭及地区等医疗的充实及紧急性较高的临床检查等的增加，普遍希望开发出即使没有临床检查专家在场，也能迅速简便而且正确地实施的特异结合分析方法。

作为现有的特异结合分析方法，已知的有利用抗原抗体反应的免疫分析、利用受体的受体分析及利用互补核酸配置的杂交的核酸探针分析等多种方法。上述方法根据其特异性的高低，被广泛地用于临床检查至各种领域。

在作为一种免疫分析方法的色谱分析法中，比如，利用在由非溶化(固定)多孔性载体或微粒子充填型载体形成的基体中使特异结合物质与液状试料接触，利用在基于毛细现象的浸透力的作用下，液状试料沿基体浸透的现象，分析试料中的分析对象物是否存在(参照日本国专利第2504923号、日本国专利第2667793号、特公平7-78503号、特开平10-73592号、特开平8-240591号各公报)。

具体地说，首先，使由通过肉眼与光学方法等可任意探测的示踪剂示踪的第1特异结合物质与分析对象物发生特异结合反应。这样，使上述分析对象物通过上述第1特异结合物质，与在上述基体中被固定化的结合材料发生结合。这样，根据在上述基体中被固定的上述第1特异结合物质的示踪量，最终分析试料中的分析对象物是否存在。

由于由应用该色谱分析法的基体构成的载体的表面积较大，可以固定大量的特异结合物质，因而引起特异结合反应的反应分子之间的冲撞频度大于液相中的反应的场合。因此，上述色谱分析法在测定敏感度与测定时间方面有利。

然而，上述的色谱分析法，第1，存在一个被称为前界现象的问题。其主要是一个在试料中的分析对象物浓度较高的场合下发生的问题。所谓前界现象，是一种针对来自特异结合反应的信号的强度不能单义决定分析对象物的浓度的现象。

具体地说，在试料中分析对象物过剩的场合下，与被示踪的第1特异结合物质结合的分析对象物及未与被示踪的第1特异结合物质结合的分析对象物(单体)在基体中存在。这样，与被示踪的第1特异结合物质结合的分析对象物及单体分析对象物与被固定在基体中的结合材料(第2特异结合物质)竞争，发生特异结合反应。这样，作为单体的分析对象物与结合剂结合，与被示踪的第1特异结合物质结合的分析对象物有时通过毛细现象在浸透力的作用下超越检测部，从该检测部流出。这样，与结合材料结合的被示踪的第1特异结合物质的量将减少，基于第1特异结合物质的特异结合反应的信号强度不能与被包含在试料中的分析对象物的量正确对应。

因此，在试料中分析对象物过剩的场合下，根据示踪量被特定的分析对象物的量将异常小，许多场合下不能正确把握试料中的分析对象物的存否及浓度。

为消除这种前界现象的影响，正确测定分析对象物的浓度等，提出了通过把试料稀释成各种浓度，分别测定不同浓度下的试料的多个信号，确认分析对象物是否以高浓度存在的设想。然而存在着必须采用多个反应容器，测定工序复杂，造成分析装置大型化及复杂化的问题。

于是，本发明的第1目的在于提供由前界现象所产生的影响较小，对试料中的分析对象物进行迅速，简便且正确的定量或定性的特异结合分析方法及用于其的特异结合分析装置。

第2，上述的现有的光谱分析法存在一个由本底产生的影响的问题。其主要是一个在试料中的分析对象物浓度较低的场合下发生的问题。所谓本底是不含分析对象物的试料所表现出的行为。比如，在对来自特异结合物质等的非特异吸附以及显色的信号进行测定场合下的试料自身的显色等所引起的信号强度与分析对象物自身的信号强度相加，其结果是测定敏感度下降。即原本底的信号强度被认为是零，与此相反，受在对来自特异结合物质等的非特异吸附以及显色的信号进行测定场合下的试料自身的显色等的影响，本底的信号强度大于零。

比如，在发生非特异吸附的场合下，为降低上述非特异吸附，通过在反应区涂布表面活性剂或密封材料等进行前期处理，添加试料，然后把反应区洗净。然而，即使实施上述操作，仍然会存在某种程度的非特异吸附，难以完全消除由本底所产生的影响。