[发明专利]一种多肽——磷酸核酮糖激酶－10.78和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——磷酸核酮糖激酶-10.78，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

自养生物吸收和同化二氧化碳的主要途径是卡尔文循环，包括羧化、还原和核酮糖-5-磷酸(RuBP)的再生过程，一次循环使3个CO₂分子转化为1分子三碳(C₃)糖。此外还有C₄途径和景天科植物酸代谢途径。磷酸核酮糖激酶(PRK)是卡尔文循环的特异性酶类，能催化核酮糖-5-磷酸发生磷酸化作用形成核酮糖-1，5-二磷酸，在此过程中利用光反应所产生的ATP，而所形成的核酮糖-1，5-二磷酸则是核酮糖二磷酸羧化酶-加氧酶的底物。不同来源的磷酸核酮糖激酶在蛋白质的大小、亚基的结构及酶活性调节等方面存在差异，但对于植物、藻类、光能自养和化能自养的细菌的研究表明，他们之间存在一些一致的特征性序列：K-[LIVM]x-R-D-x(3)-R-G-x-[ST]-x-E。Gibson J.L.，Chen J.-H.，Tower P.A.，Tabita F.R.，Biochemistry29：8085-8093(1990).

1988年，Husemann et al.等发现A.eutrophus H16的两个cfxP基因(cfxP_c和cfxP_p)分别有染色体1.7-kb的Pst I片段和1.8-kb的Pst I片段两种形式，cfxP_c的起始密码子位于其基因的492位nt，而cfxP_p的起始密码子则位于633位nt，两者都具有一个包含终止密码子TAA的、879bp长的开放阅读框，这两个基因有高度同源性，推测是cfx复制分化的结果。这两个基因均编码一由292个氨基酸组成的多肽，分别为PRK_C和PRK_P同功酶亚基，N端都含有fMet，前者等电点位6.55，后者为6.62。植物和细菌的磷酸核酮糖激酶都含有ATP结合区域。(Kossmann J.，Klintworth R.，Bowien B.Gene85：247-252(1989).)

本发明的多肽含有上述保守的特征性功能域，并且具有与磷酸核酮糖激酶家族成员相似的生物学功能，因而被认为是磷酸核酮糖激酶家族的新成员，催化核酮糖-5-磷酸发生磷酸化作用形成核酮糖-1，5-二磷酸，进行卡尔文循环。若发生突变或表达异常，则会影响自养生物卡尔文循环，从而抑制光合作用，引起功能紊乱，导致各种疾病的发生。

由于如上所述磷酸核酮糖激酶-10.78蛋白在机体内重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的磷酸核酮糖激酶-10.78蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新磷酸核酮糖激酶-10.78蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——磷酸核酮糖激酶-10.78以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码磷酸核酮糖激酶-10.78的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码磷酸核酮糖激酶-10.78的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产磷酸核酮糖激酶-10.78的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——磷酸核酮糖激酶-10.78的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——磷酸核酮糖激酶-10.78的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与磷酸核酮糖激酶-10.78异常相关的疾病的方法。

本发明涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含：具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO：2氨基酸序列的多肽。

本发明还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体：

(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；

(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；

(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。