[发明专利]基因转移的方法

权利要求书

1.一种将外源基因转入细胞的方法，此方法包括：

(a)用腺病毒载体转入细胞：

(1)第一条核酸链，该链包含一个序列，此序列有来自腺伴

随病毒并定位在待转移的外源目的基因两侧的ITRs序列；以

及

(2)第二条核酸链，该链包含一个来自腺伴随病毒的rep基

因，一个表达rep基因的启动子和一个位于两个重组酶识别序

列之间的填充片断序列，该填充片断被插入到rep基因和启动

子之间；

(b)步骤(a)得到的细胞在重组酶的作用下表达Rep蛋白，从而将外源目的基因整合到细胞染色体DNA上。

2.权利要求1中的方法，其中使用单个腺病毒将第一条核酸链和第二条核酸链转入细胞。

3.权利要求1中的方法，其中使用相互独立的腺病毒载体将第一条核酸链和第二条核酸链转入细胞。

4.权利要求1到3中之一的方法，其中重组酶是被转入细胞的重组酶基因表达的。

5.权利要求4的方法，其中重组酶基因是用腺病毒载体转移进入细胞的。

6.权利要求5的方法，其中重组酶基因和第一条核酸链是用单个腺病毒载体转移转移进入细胞的。

7.权利要求5的方法，其中重组酶基因是用腺病毒载体转移进入细胞的，该腺病毒载体不同于转移第一条核酸链或第二条核酸链的腺病毒载体。

8.权利要求1到7中之一的方法，其中位于第二条核酸链上的重组酶识别序列是loxP序列，重组酶是来自于大肠杆菌(Escherichiacoli)P1噬菌体的Cre。

9.一种转移外源基因进入细胞的系统，该系统包括：

(1)一种腺病毒载体，该载体包含第一条核酸链，第一条核酸链中有一个序列，这个序列中来自于腺伴随病毒的IRTs被定位在待转移目的基因的两侧；以及

(2)一种腺病毒载体，该载体包含第二条核酸链，此链包含一个来自于腺病毒的rep基因，一个表达rep基因的启动子和一个位于两个重组酶识别序列之间的填充片断序列，该填充片断被插入到rep基因和启动子之间。

10.一种转移外源基因进入细胞的系统，该系统包含一种腺病毒载体，该载体含有：

第一条核酸链，该链包含一个序列，此序列内有来自腺伴随病毒并定位在被转移的外源目的基因两侧的ITRs序列；以及

第二条核酸链，此链包含一个来自腺病毒的rep基因，一个表达rep基因的启动子和一个位于两个重组酶识别序列之间的填充片断序列，该填充片断被插入到rep基因和启动子之间。

11.权利要求9或10的系统，该系统包含一个转移重组酶基因进入细胞的载体。

12.权利要求1系统，其中将重组酶基因转移进入细胞的载体是腺病毒载体。

13.权利要求12的系统，其中将重组酶基因转入细胞的载体与包含第一条核酸链的腺病毒载体同一，但是与包含第二条核酸链的腺病毒载体不同一。

14.权利要求12的系统，其中包含第一条核酸链的腺病毒载体，包含第二条核酸链的腺病毒载体和将重组酶基因转入细胞的载体是彼此不同的。

15.权利要求9到14之一的系统，其中在第二条核酸链上的重组酶识别序列是loxP核苷酸序列，重组酶是来自于大肠杆菌P1噬菌体的Cre。

16.一种转化得到的细胞，外源基因的转移使用权利要求1到8中所定义的任一方法。

17.一种转化得到的细胞，外源基因的转移使用权利要求9到15中所定义的任一系统。