[发明专利]具有灭活的DNA错配修复系统的真菌细胞

权利要求书

1、丝状真菌细胞，其中参与错配修复系统的基因已经被灭活，该参与错配修复系统的基因包含：

(a)编码SEQ ID NO 2之683-758位所示多肽序列的DNA序列；或

(b)编码至少70％等同于SEQ ID NO 2之683-758位的多肽序列的DNA序列。

2、丝状真菌细胞，其中参与错配修复系统的基因已经被灭活，该参与错配修复系统的基因包含：

(a)编码SEQ ID NO 2之1-940位所示多肽序列的DNA序列；或

(b)编码至少70％等同于SEQ ID NO 2之1-940位的多肽序列的DNA序列。

3、权利要求1或2的丝状真菌细胞，其中该参与错配修复的基因是有缺陷的。

4、权利要求1或2的丝状真菌细胞，其中该参与错配修复的基因已经被暂时灭活。

5、在先权利要求中任一项的丝状真菌细胞，其中该丝状真菌细胞是镰孢属菌株，或者更优选为曲霉属菌株。

6、制备丝状真菌细胞群体的方法，其中群体中的个体细胞分别包含代表目的DNA文库的不同目的DNA序列，该方法包括下列步骤：

(a)分别将不同的目的DNA序列放置在包含权利要求1或2的丝状真菌细胞的丝状真菌细胞群体中；

(b)将(a)群体生长一段时间，使群体中单个目的DNA序列在 1或2的错配修复系统基因已被灭活的条件下复制至少一次。

7、权利要求6的方法，其中步骤(b)下的该错配修复系统是有缺陷的。

8、权利要求6的方法，其中步骤(b)下的该错配修复系统已经被暂时灭活。

9、权利要求6-8中任一项的方法，其中该丝状真菌细胞是镰孢属菌株，或者更优选为曲霉属菌株。

10、权利要求6-9中任一项的方法，其中在权利要求6的步骤(b)下，存在部分同源的目的DNA序列的体内基因间重组。

11、生产目的多肽的方法，其包括权利要求6的步骤，且其中所述目的DNA序列编码目的多肽，该方法进一步包括下列步骤：

(c)从权利要求6步骤(b)所得丝状真菌细胞群体中选择所需的目的多肽。

12、权利要求11的方法，其进一步包括下列步骤：

(d)可选的步骤，包括根据进一步的特定需要修饰所需的所选择的目的多肽的氨基酸序列；

(e)将编码权利要求11步骤(c)的目的多肽或步骤(d)的修饰型目的多肽的DNA序列放置到适合于大规模制备目的多肽的丝状真菌细胞中；

(f)在允许目的多肽表达的条件下，在至少10000m³的发酵罐中培养步骤(e)的丝状真菌细胞；

(g)分离目的多肽。

13、权利要求12的方法，其中适合于大规模制备权利要求12步骤(e)的目的多肽的丝状真菌细胞是不同于权利要求6步骤(a)的丝状真菌细胞的另一种丝状真菌细胞。

14、权利要求11-13中任一项的方法，其中所述目的多肽是从丝状真菌细胞衍生的多肽。

15、权利要求11-14中任一项的方法，其中所述目的多肽是一种酶，例如淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶、脂肪酶、木聚糖酶、磷脂酶。