[发明专利]高获得率提取替曲朵辛的系统

说明书

本发明涉及一种高获得率提取替曲朵辛(也称为河豚毒素或TTX)的系统。

按照“高获得率提取替曲朵辛的方法”(中国专利申请号00123416.3，2000年9月18日申请)，从河豚鱼卵巢中提取替曲朵辛的方法包括以下5个步骤：

第一步：用水和加入卵巢重量0.1％-1％的乙酸浸泡河豚鱼卵巢数小时，然后加压快速过滤。

第二步：加热浸取液70-95℃除去可溶蛋白。

第三步：用有机碱的水溶液(例如氨水)调节过滤出蛋白的清液pH值在6.0-7.5之间，过阳离子交换树脂富集″替曲朵辛″。

第四步：调节含替曲朵辛溶液的pH值并在一定时间内通过活性炭与硅藻土柱，去除碱性氨基酸。

第五步：真空浓缩纯化″替曲朵辛″结晶。

按照该提取方法，可将替曲朵辛的提取率提高到现有技术的3倍，即以100公斤河豚鱼有毒卵巢计算，可以提取出纯度为80-88％的″替曲朵辛″4-6克。

本发明是基于以上方法的规模化生产的应用。采用本发明的提取系统，生产流程可以连续进行。如果一次投料在20-100公斤之间，每天24小时进行，6-7天可以完成一个生产周期。如果一次投料20公斤，可获替曲朵辛0.8-1.2克，如果一次投料100公斤，可获替曲朵辛4-6克。

本发明提供的从生物组织中提取替曲朵辛的系统由如下部分组成：浸取过滤装置，加热器，离子交换柱，硅藻土-活性炭柱，旋转干燥器、真空浓缩器。

以下将参考附图进一步描述本发明，在附图中：

图1是高获得率提取替曲朵辛系统的流程图。

图2是浸取过滤装置的示意图。

图3是实施例1中用HPLC测定的替曲朵辛含量的图。

图4是实施例2中用HPLC测定的替曲朵辛含量的图。

如图1所示，本发明的提取系统命名为IWT-112，主要由如下部分组成：浸取过滤装置IWT-113，加热器，离子交换柱IWT-312，硅藻土-活性炭柱IWT-412，真空浓缩器M101。其还包括高位槽V102、V107、V105，以及输液泵P103。

浸取过滤装置IWT-113：

如图2所示，WT-113起浸泡和过滤两个作用，由金属制造，最好是不锈钢等耐腐蚀材料，由上、中、下三部分组成，分别称为“封头5”，“浸取桶7”和“减压舱”，每部分可以拆开。

封头5上设置有减速机连接轴1、压力表2、进水阀3、投料口4、安全阀14、进气阀15和放空阀16。减速机连接轴可以接减速机为螺旋桨形搅拌器8提供动力，搅拌速度在60-120转/分钟左右，搅拌的作用在于增加浸取和过滤速度，同时还可以帮助清除废渣时使用。进水阀供给第二次、第三次以至第四次浸取所用的水。进水阀3还可以用于在浸取完成后，在搅拌下注入水，用泵从投料口抽出浸取后的废渣。

安全阀保证过滤时，浸取桶内气压可控制在0.5-1.5公斤/平方厘米之间，视情况需要可以提高到6公斤/平方厘米。进气阀可连接空气压缩机保证供给浸取桶的压力。放空阀用于解除浸取桶中的气压。

“封头5”使用密封垫6和“浸取桶”通过螺丝上紧相连。“减压舱”与“浸取桶”之间设置有过滤材料，在浸取过程中，通过“减压舱”中减压或“浸取桶”中加压，使过滤能较快进行。过滤材料可以是加在不锈钢之间的滤布9、滤纸10或其它多孔过滤材料。例如由100-200目尼龙滤网，40-60目不锈钢网，孔径3毫米的金属孔板组合而成。还可以是下列组合：100-200目尼龙滤网，中-快速滤纸，40-60目不锈钢网，孔径3毫米的金属孔板12。“减压舱”通过垫圈11和“浸取桶”通过螺丝上紧相连。

在“减压舱”侧装有真空阀13和真空表17，在底部装有排液口18。

加热器可以是工业标准用的油浴加热器或者是蒸汽加热器。

在加热器的下游串联有另外一个IWT-113装置，用于过滤除去加热滤液后凝固的蛋白质等。

IWT-312离子交换柱：

为了富集与纯化替曲朵辛时更好的除去蛋白质和多肽以及它们转化产生的物质，我们设计了IWT-312离子交换柱，可以很充分地洗去离子交换柱中存在的蛋白质和多肽以及它们转化产生的物质。这些物质如果不除去，在洗脱离子交换柱时，它们和替曲朵辛一起被洗脱下来，始终和替曲朵辛保留在一起，以后很难使替曲朵辛从含有它们的很稠的溶液中沉淀出来。

IWT-412硅藻土-活性炭柱：