[发明专利]一种新的多肽——gamma－COP13和编码这种多肽的多核苷酸

说明书

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明描述了一种新的多肽——gamma-COP13，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本发明还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。

内质网里合成蛋白质是通过高尔基体运载小泡运输至血浆膜表面的(Rothman，J.et al.，1992，Natrure，355,409-415)。高尔基运载小泡来源于带有细胞溶胶和ATP的高尔基膜孵化(Orci，L.etA1.，1986，Cell，46,171-184)。这些运载小泡就叫COPI-包被小泡，它们的直径一致大约为75纳米并且包含一个有细毛的蛋白质外被。其外被蛋白包括外被体和ADP-核糖基化因子两部分(Serafini，T.et al.，1991，Nature，349,215-220)。外被体是一个蛋白质复合体，由7个亚基组成，分别是α、β、β、γ、δ、ε，ζ-COP。外被体以可溶的形式存在于细胞质中，当COPI包被小泡形成时，外被体就聚集到高尔基膜上(Palmer，D.et al.，1993，J.Biol.Chem.268，12083-12089)。哺乳动物和酵母细胞的外被体在体内结合一些融合蛋白，这些融合蛋白包含dilysine基元，该基元是内质网膜蛋白在细胞质中的典型尾部(Cosson，P.etal.，1994，Science，263，1629-1631)。该KKXX基元位于C末端，作为膜蛋白从内质网到后内质网的运输信号G(Gaynor，E.C.et al.，1994，Cell Biol.127，653-655)。

COPI包被小泡所包被的膜蛋白是P23和P24家族。P24家族蛋白质包括一个大的luminal结构域，一个单独的转膜结构域和一个短的胞质尾巴。COPI包被小泡的外被体能与所有的内质网提取基元以及P24家族成员的二苯胺基元结合(Sohn，K.etal.，1996，J.Cell Biol，135，1239-1248)。这表明包被复合体参与了蛋白质的逆行转运(Cosson，P.et al.，1994，Science，263，1629-1631)。在外被体与P23结合过程中，γ-COP是与P23特异性结合的外被体亚基。并且，Wbplp和P23胞质尾巴分享一个共同的γ-COP结合位点。上文所提的融合蛋白中的KKXX基元也是和γ-COP结合的。

γ-COP是唯一的外被体标记蛋白，不仅是因为它与P23多肽结合，还因为它在琼脂糖颗粒表面和膜的细胞质结构域模拟突起中所表现的独立方式。γ-COP基因编码一个874个氨基酸的蛋白质，分子量为97，385。γ-COP可能功能就是与KKXX基元结合调节膜蛋白到COPI包被小泡的逆行性分装。

通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本发明的多肽的表达谱与gamma-COP的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本发明被命名为gamma-COP13。

由于如上所述gamma-COP13蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的gamma-COP13蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新gamma-COP13蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。

本发明的一个目的是提供分离的新的多肽——gamma-COP13以及其片段、类似物和衍生物。

本发明的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。

本发明的另一个目的是提供含有编码gamma-COP13的多核苷酸的重组载体。

本发明的另一个目的是提供含有编码gamma-COP13的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。

本发明的另一个目的是提供生产gamma-COP13的方法。

本发明的另一个目的是提供针对本发明的多肽——gamma-COP13的抗体。

本发明的另一个目的是提供了针对本发明多肽——gamma-COP13的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。

本发明的另一个目的是提供诊断治疗与gamma-COP13异常相关的疾病的方法。